Pembersihan ambulans memerlukan keseimbangan kebersihan kenderaan am dengan keperluan keselamatan perubatan khusus; ia biasanya dibahagikan kepada tiga komponen: pembersihan luaran, pembersihan kabin dalaman, dan pembasmian kuman peralatan perubatan. Pembersihan luaran tertumpu terutamanya pada penyingkiran lumpur, habuk dan bahan cemar; ini biasanya dicapai dengan membilas dengan air bersama detergen neutral, sambil mengelak penggunaan bahan kimia yang sangat menghakis untuk mengelakkan kerosakan pada cat kenderaan dan pelekat amaran.
Memandangkan kabin dalaman berfungsi sebagai ruang untuk prosedur perubatan, piawaian pembersihan untuk kawasan ini adalah lebih ketat. Sejurus selepas selesai setiap misi pengangkutan pesakit, sebarang serpihan atau bahan cemar di dalam kabin mesti dialihkan segera. Tambahan pula,-permukaan sentuhan tinggi-seperti pengusung, tempat duduk, susur tangan dan lantai-mesti menjalani pembasmian kuman yang menyeluruh. Ini biasanya dicapai dengan mengelap atau menyembur permukaan ini dengan pembasmi kuman yang memenuhi piawaian perubatan yang ditetapkan, dengan itu memastikan penyingkiran bakteria dan virus yang berkesan serta mencegah-pencemaran silang.
Berkenaan dengan peralatan perubatan dalam pesawat-seperti monitor pesakit, defibrilator dan sistem penghantaran oksigen-prosedur pembersihan dan pembasmian kuman khusus mesti dipatuhi mengikut ketat protokol pengurusan peranti perubatan. Penjagaan khusus mesti diambil untuk mengelakkan cecair daripada menembusi bahagian dalam peranti ini, yang boleh menjejaskan fungsinya yang betul. Selain itu, kenderaan harus menjalani pembersihan mendalam secara berkala dan pembasmian kuman menyeluruh; khususnya, berikutan pengangkutan pesakit dengan penyakit berjangkit atau penyelesaian misi yang melibatkan risiko pencemaran yang tinggi, protokol pembasmian kuman terminal yang ketat mesti dilaksanakan untuk memastikan kenderaan secara konsisten memenuhi semua keperluan keselamatan untuk kegunaan perubatan.
